Genotipagem e fenotipagem podem identificar, e até prever, a resistência às drogas do HIV
Mesmo para pessoas com adesão ideal à terapia, espera-se que algum grau de resistência ao HIV se desenvolva ao longo do tempo devido a mutações naturais do vírus. Em outros casos, a resistência pode se desenvolver rapidamente quando a adesão abaixo do ideal permite que populações resistentes de HIV prosperem, levando eventualmente à falha do tratamento.
Quando ocorre falha no tratamento, combinações alternativas de medicamentos devem ser selecionadas para suprimir essa nova população de vírus resistentes.
O teste de resistência genética ajuda a facilitar isso, identificando os tipos de mutações resistentes no "pool viral" de uma pessoa, enquanto verifica a suscetibilidade desses vírus a possíveis agentes anti-retrovirais .
Duas ferramentas primárias são usadas para testes de resistência genética no HIV: o teste genotípico do HIV e o teste fenotípico do HIV .
O que é um genótipo e um fenótipo?
Por definição, um genótipo é simplesmente a composição genética de um organismo, enquanto um fenótipo é as características ou traços observáveis desse organismo.
Os ensaios genotípicos (ou genotipagem) funcionam identificando as instruções herdadas dentro do código genético de uma célula, ou DNA. Ensaios fenotípicos (ou fenotipagem) confirmam a expressão dessas instruções sob a influência de diferentes condições ambientais.
Embora a associação entre o genótipo e o fenótipo não seja absoluta, a genotipagem pode muitas vezes predizer o fenótipo, particularmente quando mudanças no código genético conferem às mudanças esperadas características ou características - como no caso do desenvolvimento de resistência a drogas.
A fenotipagem, por outro lado, confirma o "aqui e agora". Seu objetivo é avaliar a reação de um organismo a mudanças específicas na pressão ambiental - como quando o HIV é exposto a diferentes medicamentos e / ou concentrações de drogas.
Explicando a genotipagem do HIV
A genotipagem do HIV é geralmente a tecnologia mais comum usada para testes de resistência.
O objetivo do ensaio é detectar mutações genéticas específicas na região gag-pol do genoma do vírus (ou código genético). Esta é a região onde as enzimas transcriptase reversa, protease e integrase - os alvos da maioria das drogas anti-retrovirais - estão codificadas na cadeia do DNA.
Ao primeiro amplificar o genoma do HIV usando a tecnologia de reação em cadeia da polimerase (PCR) , os técnicos de laboratório podem sequenciar (ou "mapear") a genética do vírus usando várias tecnologias de detecção de mutação.
Essas mutações (ou acumulação de mutações) são interpretadas por técnicos que analisam a relação entre as mutações identificadas e a suscetibilidade esperada do vírus a diferentes drogas antirretrovirais. Bases de dados on-line podem auxiliar comparando a seqüência do teste com a de um protótipo do tipo "selvagem" (isto é, o HIV que não contém mutações resistentes).
A interpretação desses testes é usada para determinar a suscetibilidade ao medicamento, com o maior número de mutações importantes conferindo a níveis mais altos de resistência a drogas .
Explicando Fenotipagem do HIV
A fenotipagem do HIV avalia o crescimento do HIV da pessoa na presença de um fármaco, depois compara-o ao crescimento de um vírus do tipo selvagem, controle, no mesmo fármaco.
Assim como nos ensaios genotípicos, os testes fenotípicos amplificam a região gag-pol do genoma do HIV.
Esta seção do código genético é então "enxertada" em um clone do tipo selvagem usando tecnologia de DNA recombinante . O vírus recombinante resultante é usado para infectar células de mamíferos in vitro (no laboratório).
A amostra viral é então exposta a concentrações crescentes de diferentes drogas antirretrovirais até que 50% e 90% da supressão viral seja alcançada. As concentrações são então comparadas com os resultados do controle, amostra de tipo selvagem.
As alterações relativas da "dobra" fornecem o intervalo de valores pelo qual a susceptibilidade do medicamento é determinada. Uma mudança de quatro vezes significa simplesmente que quatro vezes a quantidade de droga foi necessária para alcançar a supressão viral em comparação com a do tipo selvagem.
Quanto maior o valor da dobra, menos suscetível o vírus é a um medicamento específico.
Estes valores são então colocados dentro dos intervalos clínicos e clínico-superiores, com valores superiores conferindo níveis mais elevados de resistência aos fármacos. (Veja o relatório da amostra .)
Quando é realizado um teste de resistência genética?
Nos EUA, o teste de resistência genética é tradicionalmente realizado em pacientes virgens de tratamento para determinar se eles têm alguma resistência a drogas "adquirida". Estudos nos EUA sugerem que entre 6% e 16% dos vírus transmitidos serão resistentes a pelo menos um medicamento anti-retroviral, enquanto aproximadamente 5% serão resistentes a mais de uma classe de medicamento.
O teste de resistência genética também é usado quando há suspeita de resistência aos medicamentos em indivíduos em terapia. O teste é realizado enquanto o paciente está tomando o regime de falha ou dentro de quatro semanas após a descontinuação do tratamento se a carga viral for maior que 500 cópias / mL. O teste genotípico é geralmente preferido nestes casos, pois custam menos, têm um tempo de resposta mais rápido e oferecem maior sensibilidade para detectar misturas de vírus de tipo selvagem e resistentes.
Uma combinao de testes fenoticos e genoticos geralmente preferida para pessoas com resistcia complexa a mtiplos fmacos, particularmente para aqueles expostos a inibidores de proteases .
Fontes:
Organização Mundial da Saúde (OMS). "Folha Informativa de Resistência a Medicamentos do HIV". Genebra, Suíça; 11 de abril de 2011.
Kim, D; Ziebell, R .; Saduvala, N; et al. "Tendência de mutações associadas à resistência aos medicamentos ARV VIH-1 transmitidas: 10 áreas de vigilância do HIV, EUA, 2007-2010." 20ª Conferência sobre Retrovírus e Infecções Oportunistas. Atlanta, Geórgia; 6 de março de 2013; Resumo oral 149.
Institutos Nacionais de Saúde (NIH). "Diretrizes para Uso de Agentes Antirretrovirais em Adultos e Adolescentes Infectados com HIV-1". Bethesda, Maryland; 11 de outubro de 2013.