O que é análise de PCR?
A reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma técnica de laboratório projetada para identificar pequenas quantidades de DNA em uma amostra por um processo conhecido como amplificação . Durante a amplificação por PCR, o DNA de interesse é copiado repetidamente até que haja o suficiente para análise e detecção. Por exemplo, a PCR pode ser usada para identificar pequenas quantidades de DNA dos organismos causadores de gonorréia ou clamídia que estão presentes em uma amostra de urina .
Como o PCR funciona?
O primeiro passo na PCR é aquecer a amostra de modo que o DNA de fita dupla se separe em duas cadeias simples - isso é chamado de desnaturação . Então, os primers , amostras curtas de DNA que correspondem às extremidades da sequência de DNA de interesse, são combinadas com o DNA da amostra. Depois disso, uma DNA polimerase é usada para iniciar a replicação do DNA na localização do primer. Finalmente, o DNA é aquecido para separar os filamentos mais uma vez, e todo o processo de PCR começa novamente.
A quantidade do segmento de DNA de interesse presente na amostra aumenta exponencialmente com cada ciclo de PCR: uma cópia torna-se duas, depois torna-se quatro, depois torna-se oito, etc; De modo geral, apenas 20 a 40 ciclos são necessários para determinar se o DNA em questão está presente (e, se for, fornecer uma amostra suficiente para análise).
Todos os passos de uma reação em cadeia da polimerase - desnaturalizando o DNA, aplicando os primers e alongando o DNA - acontecem em diferentes temperaturas, então após a mistura inicial ser montada, os passos podem ser controlados através de um processo conhecido como termociclagem , em que a temperatura é mantida nos níveis necessários por apenas o tempo suficiente para que cada etapa ocorra.
Assim, a PCR é uma maneira eficiente de amplificar a quantidade de DNA alvo em um único tubo de ensaio com pouca necessidade de intervenção humana.
A reação em cadeia da polimerase representou uma revolução na técnica biológica quando foi desenvolvida no início dos anos 80, e o criador da PCR, Kary Mullis, ganhou o Prêmio Nobel de Química por seu trabalho em 1993.
Por que a PCR é relevante para testes de DST?
Reação em cadeia da polimerase, e técnicas relacionadas, como reação em cadeia da ligase , estão provando ser de importância crescente para o teste de DST. Isso ocorre porque essas técnicas podem identificar diretamente pequenas quantidades de DNA ou RNA viral em amostras. Identificar o código genético de um patógeno não requer que o patógeno esteja vivo - como cultura bacteriana ou cultura viral . Também não requer que a infecção tenha ocorrido há muito tempo para que as pessoas tenham desenvolvido uma reação de anticorpos detectável (como é detectada por ELISA ). Isso significa que as técnicas de PCR podem às vezes detectar doenças mais precocemente do que outros testes e sem tanta necessidade de se preocupar em manter as amostras vivas ou testar exatamente no momento certo.